進口紫外分光光度計技術問題指南

 　　進口紫外分光光度計自建立至今已有四十多年的歷史，各種通用型分光光度計在國外應用已相當普遍，但國產的分光光度計仍以單波長法為主。國內有人根據紫外分光法的基本原理，因陋就簡，利用普通的分光光度計建測定法，即先用某一波長比色，記錄吸光度，再用另一波長比色后記錄另一吸光度，然后按紫外分光法進行計算，獲得了較滿意的結果。近年來，應用紫外分光法并結合后分光技術的全自動生化分析儀已大量引進到國內，但除了廠家提供的數據外，不少人在進口紫外分光光度計上自行編制試驗程序時對次波長選擇的重要性往往認識不足，具有較大的隨意性，由此造成試驗結果誤差還不知原因所在，因此有必要加強對紫外分光法和后分光技術的認識。但可以預見，隨著*儀器的引進以及進口紫外分光光度計逐步進入市場，這一新技術必將為越來越多的人所認識和接受，并在醫(yī)學檢驗領域得到廣泛的應用。
　　文獻指出影響進口紫外分光光度計測定精密度的因素是：光輻射噪聲，電源不穩(wěn)和讀出噪聲，采用強光源可以改善測定的精密度。當試樣中含有干擾物質時，由于雙波長法減少了樣品的形式誤差，故測定的精密度優(yōu)于單波長法。
　　影響進口紫外分光光度計準確度的因素是：
　?、儆苫瘜W干擾物引起的誤差，但這種誤差要比單波長法小得多。
　　②由物理干擾引起的誤差，但可以通過采用較小的雙波長差等方法來減少誤差，而且這種誤差本身就比單波長法更小。
　?、塾蓛x器的非理想性如比色杯的性質和位置，以及信號失調、狹縫過大和雜散光等引起的誤差，其中尤以后者引起的誤差為大，因此要求進口紫外分光光度計的波長精度在高并且盡量減少雜散光。
　　所謂后分光技術是相對傳統(tǒng)的分光光度計而言的。*，光電比色法賴以建立的Lambert—Beer定律只適用于單色光，單色光純度越高則測定結果的精密度和準確度越好，如果用混合光比色，則溶液的吸光度與液層厚度和溶液濃度間不成比例關系。因此，傳統(tǒng)的進口紫外分光光度計是以單色器（棱鏡或光柵）對入射光進行分光，然后使特定波長的單色光通過待測溶液進行比色測定，而現代生化分析儀上采用所謂后分光技術的分光光度計則是直接以光源燈所發(fā)出的混合光透過待測溶液，經溶液吸收后再用全息光柵（Holographic Grating，是目前zui的分光器件，進口紫外分光光度計既可以簡化光路，又可以減少雜散光，由它色散后投射到二極管矩陣上的光譜焦平面的波長精度在±2nm以內）[6]對出射光進行分光，然后將純度很高的不同波長的單色光折射到光電二極管矩陣（Photodiode Array）上，由于位置不同，矩陣上的每一個光電二極管只能接收某個特定波長的單色光。有人據此認為這種類型的進口紫外分光光度計只是用某幾個波長的濾光板，光不純，波長精度差，其實這是一種誤解。這種儀器在編制程序時（廠家或用戶）已預先設定好某項試驗選用某個波長，儀器工作時在微機的控制下只接收所選波長的光電管上產生的電信號并將其轉變成相應的吸光度。
　　目前的大多數生化分析儀的二極管矩陣都有7到10個光電二極管，包含了從340nm～700nm范圍內常用的7～10個測定波長[4,5]，有的分析儀甚至多達16個波長。由于現代生化分析儀采用凹面全息光柵為后分光器件，從而取消了斬光器。使進口紫外分光光度計的結構變得相對簡單，而且更為關鍵的是，采用這種結構的后分光技術使生化分析儀上多頂目同時測定變?yōu)楝F實。否則，如果仍按傳統(tǒng)分光光度計一樣以單色光進行比色測定，為適應不同頂目在短時間內用不同波長比色的需要，進口紫外分光光度計分光器件必須在幾秒甚至更短的時間內頻繁地變動反射鏡的位置，這對于機械來說是難以辦到的，即使制成也會易于損壞而缺乏實用價值。后分光技術的建立使上述問題迎刃而解，而且使雙波長分光光度法變得更為實用。